Određivanje sadržaja oksalne kiseline u voću i povrću visokoefikasnom tečnom hromatografijom (HPLC)
1. Eksperimentalni princip i dizajn metode
Kao uobičajena organska kiselina u voću i povrću, sadržaj oksalne kiseline direktno utiče na ukus i nutritivnu vrijednost hrane. Ovaj eksperiment koristi reverzno-faznu tečnu hromatografiju visokih performansi (RP-HPLC). U uslovima kisele mobilne faze, oksalna kiselina se odvaja od interferirajućih supstanci po osnovnoj liniji pomoću C18 hromatografske kolone. Ultraljubičasti detektor postavljen na 210 nm koristi se za kvantitativnu analizu, zasnovanu na UV apsorpcijskim karakteristikama karboksilnih grupa u molekulama oksalne kiseline.
2. Standardna krivulja i priprema uzorka
Za pripremu standardnih rastvora koristi se metoda gradijentnog razrjeđivanja: precizno se odmjeri 25,0 mg oksalne kiseline dihidrata i razrijedi do 25 mL ultračistom vodom da bi se dobio osnovni rastvor od 1 mg/mL. Ovo se zatim sekvencijalno razrjeđuje u niz standardnih rastvora od 50, 100, 200, 400 i 800 µg/mL, pri čemu se svaka koncentracija ubrizgava u tri primjerka.
Za pripremu uzorka koristi se ekstrakcija uz pomoć mikrovalova: izvagati 5,00 g homogenata voća/povrća, dodati 10 mL rastvora hlorovodonične kiseline koncentracije 0,1 mol/L, tretirati mikrovalovima na 60°C 10 minuta, filtrirati kroz membranski filter od 0,45 µm i sakupiti filtrat za testiranje.
3. Optimizacija hromatografskih uslova
Mobilna faza je sistem kalijum dihidrogen fosfatnog pufera (pH 2,5) - acetonitril (95:5) koncentracije 0,01 mol/L, sa brzinom protoka od 0,8 mL/min i temperaturom kolone od 35°C. Podešavanje udjela acetonitrila pokazuje da kada organska faza pređe 10%, vrijeme zadržavanja oksalne kiseline se skraćuje na manje od 3 minute, ali dolazi do stvaranja repova na vrhu. Pod konačnim optimiziranim uslovima, vrijeme zadržavanja oksalne kiseline je 4,2 minute, čime se postiže potpuno odvajanje od susjedne limunske i jabučne kiseline (rezolucija > 1,5).
4. Validacija metode
Verifikacija linearnog raspona pokazuje dobru linearnu vezu između površine vrha i koncentracije u rasponu od 10–1000 µg/mL (R² = 0,9993). Granica detekcije (LOD), određena metodom odnosa signal-šum, iznosi 0,5 µg/mL. U testovima ponovljivosti, RSD za šest ponovljenih određivanja istog uzorka špinata iznosi 1,8%. Eksperimenti oporavka klasa na tri nivoa (80%, 100% i 120%) daju prosječne oporavke od 98,2%, 102,4% i 97,8%, respektivno, ispunjavajući zahtjeve za kvantitativnu analizu.
5. Analiza stvarnih uzoraka
Testirano je šest komercijalno dostupnih vrsta voća i povrća: špinat (356 ± 12 mg/100 g), celer (215 ± 9 mg/100 g), paradajz (18 ± 2 mg/100 g), jabuka (6 ± 1 mg/100 g), banana (nije detektovana) i brokula (89 ± 5 mg/100 g). Poređenje sa nacionalnom standardnom metodom (GB 5009.277-2016) pokazuje da je relativno odstupanje između dvije metode manje od 5%, što potvrđuje pouzdanost ove metode. HPLC metoda posebno pokazuje veću osjetljivost od tradicionalnih metoda titracije pri analizi uzoraka sa niskim sadržajem.
6. Ključne napomene
Strogo kontrolišite pH vrijednost tokom prethodne obrade uzorka. Ako pH ekstrakta pređe 3, taloženje kalcijum oksalata će dovesti do niskih rezultata ispitivanja. Mobilnu fazu treba pripremati svježu svakodnevno kako bi se izbjeglo taloženje soli i začepljenje kolone. Nakon svakih 20 injekcija, isperite kolonu smjesom acetonitril-voda (30:70) tokom 30 minuta kako biste spriječili smanjenje efikasnosti kolone. Za uzorke koji sadrže pigmente (npr. ljubičasti kupus), preporučuje se dodavanje koraka prečišćavanja ekstrakcijom na čvrstoj fazi prije injekcije.
7. Upute za primjenu i širenje
Ova metoda se može proširiti na detekciju oksalne kiseline u biološkim uzorcima kao što su urin i krv. Prilagođavanjem sastava mobilne faze (npr. dodavanjem tetrabutilammonijum hidroksida), oksalna kiselina i njeni metaboliti mogu se istovremeno odrediti. U kombinaciji s detektorom masene spektrometrije, može se uspostaviti preciznija metoda detekcije tragova. U prehrambenoj industriji, ova metoda može pružiti važnu podršku podacima za odabir sorti s niskim sadržajem oksalne kiseline i optimizaciju procesa kuhanja.
Zibo Anhao Chemical Co., Ltd. – Oksalna kiselina
Zibo Anhao Chemical Co., Ltd. je pouzdan dobavljač i izvoznik visokokvalitetne oksalne kiseline (industrijskog kvaliteta, min. 99,6%) iz Shandonga, Kina. Naša oksalna kiselina je bijela kristalna čvrsta supstanca, poznata i kao etandionska kiselina, s molekularnom formulom C₂H₂O₄. Odlikuje se visokom čistoćom, niskim sadržajem nečistoća i stabilnim kvalitetom u svim serijama, zadovoljavajući zahtjeve tekstilne, kožarske, metalurške, prerade rijetkih zemalja, hemijskog čišćenja i građevinske industrije.
Isporučujemo i bezvodnu i dihidratnu oksalnu kiselinu, dostupnu u vrećama od 25 kg, vrećama od 50 kg i vrećama za rasuti teret od 1000 kg. Strogim QC procedurama, kompletnim izvještajima o ispitivanju i fleksibilnim planovima snabdijevanja osiguravamo stabilnu isporuku i dosljedne performanse za globalne kupce. Naši proizvodi se široko izvoze u jugoistočnu Aziju, Evropu, Afriku i Ameriku, stekavši priznanje za pouzdan kvalitet i konkurentne cijene.
Odaberite Zibo Anhao Chemical za pouzdanu opskrbu oksalnom kiselinom i profesionalnu hemijsku uslugu na jednom mjestu.
Odaberite Zibo Anhao Chemical za visokočistu oksalnu kiselinu koja pruža stabilne performanse i vrijednost za vaše poslovanje. Kontaktirajte nas za narudžbe na veliko ili tehničke specifikacije: info@anhaochemical.com
